hlL-2/IFN-γ嵌合基因原核表达质粒的构建与表达

华南理工大学学报（自然科学版） ›› 2005, Vol. 33 ›› Issue (1): 84-87.

hlL-2/IFN-γ嵌合基因原核表达质粒的构建与表达

邵亚明¹ 田泽维² 罗发兴¹ 陈光明² 杨富强²

1．华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640；2．解放军458医院全军肝病研究中心，广东广州 510602

收稿日期:2004-04-13 出版日期:2005-01-25 发布日期:2005-01-25
通信作者: 邵亚明(1980-)，男，硕士生，主要从事生物制药方面的研究． E-mail:symhhit@sohu.com
作者简介:邵亚明(1980-)，男，硕士生，主要从事生物制药方面的研究．
基金资助:
国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2001AA217141)

Construction and Expression of the Plasmid of hlL-2/IFN-γ Chimeric Gene

Shao Ya-ming¹ Tian Ze-wei² Luo Fa-xing¹ Chert Guang-ming² Yang Fu-qiang²

1.College of Light Chemistry and Food Science,South China Univ.of Tech.,Guangzhou 510640,Guangdong,China;2.PLA Liver Disease Research Center,the 458th Hospital of PLA,Guangzhou 510602,Guangdong,China

Received:2004-04-13 Online:2005-01-25 Published:2005-01-25
Contact: 邵亚明(1980-)，男，硕士生，主要从事生物制药方面的研究． E-mail:symhhit@sohu.com
About author:邵亚明(1980-)，男，硕士生，主要从事生物制药方面的研究．
Supported by:
国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2001AA217141)

摘要/Abstract

摘要： 为构建hlL-2/IFN-γ．嵌合基因原核表达质粒，筛选其高效表达工程茵，设计特异性引物，PCR扩增目的基因并克隆至pPROEX HTb质粒NcoⅠ/Hindn Ⅲ 位点，经双酶切及序列测定筛选阳性克隆，IPTG诱导工程茵后以SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白的表达情况，并测定其抗原性和生物学活性，结果成功构建了工程茵Top10 F’[hlL-2/IFN-γ ]，经优化表达条件后，目的蛋白表达量约占茵体总蛋白的30% ，分子质约为34 ku．ELISA和Western—blot实验结果表明，目的蛋白能特异性结合抗IFN-γ 抗体，呈阳性反应，生物学活性测定显示其hlL-2和IFN-γ 比活性分别为1．7×10 ⁷U/mg与3．2×10⁶U／mg．

关键词: 白细胞介素-2, 干扰素-&gamma, 嵌合基因, 表达, 大肠杆菌

Abstract:

In order to construct the plasmid of hlL-2/IFN-γ chimeric gene and screen high-level expressing bacteria,hlL-2/IFN-γ chimeric gene amlzIlifted by PCR with specific primers was cloned into NcoⅠ/Hindn Ⅲ sites of pPROEX HTb plasmid vector,and the recombinant was screened by means of double enzyme digestion and sequencing.The proteins expressed by recombinant E.coli Top10 F’/[hlL-2/IFN-γ ]were analyzed with SDS-PAGE,and tested its antigenecity and biological activity.thus successfully constructing the plasmid.After optimizing the expression conditions.the recombinant strain expresses the target fusion protein with a relative molecular mass of 34 ku and comprises 30% of the total bacteria protein.The results of EHSA and Western-blot analyses indicate that the recombinant strain can specially combine with anti-IFN-γ- antibody.Moreover,the results of activity measuration indicate that the activities of lL-2 and IFN-γ respectively achieve 1.7×10⁷ U/mg and 3.2×10⁶U/mg.

Key words: hlL-2, IFN-&gamma, chimeric gene, expression, E.coli

邵亚明田泽维罗发兴陈光明杨富强. hlL-2/IFN-γ嵌合基因原核表达质粒的构建与表达[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2005, 33(1): 84-87.

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