HBscFv毕赤酵母工程菌的中试发酵及产物纯化

华南理工大学学报（自然科学版） ›› 2005, Vol. 33 ›› Issue (1): 79-83.

HBscFv毕赤酵母工程菌的中试发酵及产物纯化

熊盛¹ 谢秋玲² 王一飞¹ 邓宁² 粟宽源³

1．暨南大学生物医药研究开发基地，广东广州 510630；2．暨南大学生命科学与技术学院，广东广州 510630；3．解放军458医院传染病中心，广东广州 510602

收稿日期:2004-02-19 出版日期:2005-01-25 发布日期:2005-01-25
通信作者: 熊盛(1972-)，男，博士，主要从事生物技术方面的研究 E-mail:xiongsheng99@263.net
作者简介:熊盛(1972-)，男，博士，主要从事生物技术方面的研究
基金资助:
国家自然科学基金资助项目(30371661，30400071)；广东省自然科学基金团队项目(粤科基办[2003]11)；广州市科技攻关项目(2003Z3-E0401)

Fermentation and Purification of HBscFv from P．pastoris on Pilot Scale

Xiong Sheng¹ Xie Qiu-ling² Wang Yi-fei¹ Deng Ning² Su Kuan-yuan³

1. Bio-medical Research and Development Center,Jinan Univ.,Guangzhou 5 10632,Guangdong,China;2.College of Bioscience and Biotechnology ,Jinan Univ.,Guangzhou 510632,Guangdong,China;3.Center of Infectious Diseases,the 458th Hospital of PLA,Guangzhou 510602,Guangdong,China

Received:2004-02-19 Online:2005-01-25 Published:2005-01-25
Contact: 熊盛(1972-)，男，博士，主要从事生物技术方面的研究 E-mail:xiongsheng99@263.net
About author:熊盛(1972-)，男，博士，主要从事生物技术方面的研究
Supported by:
国家自然科学基金资助项目(30371661，30400071)；广东省自然科学基金团队项目(粤科基办[2003]11)；广州市科技攻关项目(2003Z3-E0401)

摘要/Abstract

摘要： 中试规模生产可溶性重组人抗HBsAg单链抗体(HBscFv)，分泌表达HBscFv的巴氏毕赤酵母(P.pastoris)工程茵在30L发酵罐中进行补料分批培养．上清中的HBscFv以离子交换及免疫亲和层析两步法进行纯化．发现酵母工程茵经7d补料分批培养后，600nm波长下的光密度值(OD₆₀₀)达到334，目的蛋白表达量为260mg/L．纯化后，可获得纯度为95%的HBscFv，产量为171 mg/L．活性测定结果表明，HBscFv制品的比活性为(2．52±0．17) μg^-2，与大肠杆菌来源的HBscFv无明显差异．

关键词: 乙肝表面抗原, 单链抗体, 巴氏毕赤酵母, 发酵, 纯化

Abstract:

In order to produce soluble recombinant human anti-HBsAg single-chain Fv(HBscFv)in pilot scale,recombinant P.pastoris excreting HBscFv was inoculated in a 30-L fermentor to carry out a fed-batch culture.HB-scFv in the supernatant was then purified with a two-step procedure.namely,ion-exchange and immuno-affinity chromatography.It is found that,after the culture for 7 days,the cell density(OD6o0)of recombinant P．pastoris and the yield of target protein are respectively 334 and 260 mg/L．After the purification，HBscFv is collected with purity of 95%and a productivity of 171 mg/L.The results of bioassay demonstrate that the specific activity of HBscFv produced by P.pastoris is(2.52±0.17)μg^-2,without significant difference from that produced by E.coli..

Key words: HBsAg, single-chain Fv, P.pastoris, fermentation, purification

熊盛谢秋玲王一飞邓宁粟宽源. HBscFv毕赤酵母工程菌的中试发酵及产物纯化[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2005, 33(1): 79-83.

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