人酸性成纤维细胞生长因子突变体表达与修饰

华南理工大学学报（自然科学版） ›› 2005, Vol. 33 ›› Issue (1): 88-91,98.

人酸性成纤维细胞生长因子突变体表达与修饰

郑青¹ 苏志坚¹ 吴晓萍² 许华² 黄志锋¹ 赵文¹ 姚成灿² 黄亚东¹ 李校堃²

1．暨南大学医药生物技术研究开发中心，广东广州 510632；2．暨南大学广东省生物工程药物重点实验室，广东广州 510632

收稿日期:2004-01-07 出版日期:2005-01-25 发布日期:2005-01-25
通信作者: 郑青(1964-)，男，博士，副教授，主要从事生物制药方面的研究 E-mail:qz01cn@yahoo.com.cn
作者简介:郑青(1964-)，男，博士，副教授，主要从事生物制药方面的研究
基金资助:
广东省自然科学基金资助项目(010424)；863计划资助项目(2002AA2Z3318)

Expression and Modification of the M utant of Human Acidic Fibroblast Growth Factor

Zheng Qing¹ Su Zhi-jian¹ Wu Xiao-ping² Xu Hua² Huang Zhi-feng¹ Zhao Wen¹ Yao Cheng-can² Huang Ya-dong¹ Li Xiao-kun²

1.Biopharmaeeutieal Research& Development Center,Jinan Univ.,Guangzhou 5 10632,Guangdong,China;2.Key Laboratory of Biopharmaceutics of Guangdong Province,Jinan Univ.,Guangzhou 510632,Guangdong,China

Received:2004-01-07 Online:2005-01-25 Published:2005-01-25
Contact: 郑青(1964-)，男，博士，副教授，主要从事生物制药方面的研究 E-mail:qz01cn@yahoo.com.cn
About author:郑青(1964-)，男，博士，副教授，主要从事生物制药方面的研究
Supported by:
广东省自然科学基金资助项目(010424)；863计划资助项目(2002AA2Z3318)

摘要/Abstract

摘要： 采用聚合酶链式反应(PCR)法将人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)基因中编码第98位和第132位半胱氨酸(Cys)的密码子突变为编码丝氨酸(Ser)的密码子，构建重组质粒pET3c-haFGF_Ser98，132帆 32，转化大肠杆菌BL21(DE3)，表达率达到23．48% ．用M1Tr法测定产物的活性，发现haFGF_Ser98，132突变体的比活与天然haFGF相似．采用单甲氧基聚乙
二醇(mPEG)5000-马来酸酰亚胺酯定点修饰第3l位Cys，修饰率达到30％以上，修饰产物的比活性保留55．53% ．

关键词: 人酸性成纤维细胞生长因子, 定点突变, 突变体

Abstract:

The codons of the 98 th and the 1 32nd cysteine(Cys)of haFGF(Human Acidic Fibroblast Growth Fac-tor)cDNA Were reFIlaced with the serine(Ser)codon by means of PCR.Thus,the recombinant plasmid pET3c-haFGF_Ser98,132 was constructed,which was then transformed into E coli BI21(DE3),with an expression level of 23.48%.The activity of the product was detected by MTT method,with the conclusion that the mutant of haFGF_Ser98,132 is of an activitv similar to stan dard haFGF. Maleimide-6-aminocaproyl-mPEG5000 ester was site-directed couple to the 31 st cysteine residue of haFGF_Ser98,132 .The result indicates that the modification rate is up to 30% ,and the re-mained specific activity of the purified PEG-haFGF_Ser98,132 is 55.53% .

Key words: human acidic fibroblast growth factor, site-directed mutation, mutant

郑青苏志坚吴晓萍许华黄志锋赵文姚成灿黄亚东李校堃. 人酸性成纤维细胞生长因子突变体表达与修饰[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2005, 33(1): 88-91,98.

Zheng Qing Su Zhi-jian Wu Xiao-ping Xu Hua Huang Zhi-feng Zhao Wen Yao Cheng-can Huang Ya-dong Li Xiao-kun. Expression and Modification of the M utant of Human Acidic Fibroblast Growth Factor[J]. Journal of South China University of Technology (Natural Science Edition), 2005, 33(1): 88-91,98.

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