α-葡聚糖酶在毕赤酵母中的组成型表达

华南理工大学学报(自然科学版) ›› 2012, Vol. 40 ›› Issue (5): 96-100.

α-葡聚糖酶在毕赤酵母中的组成型表达

梁达奉^1,2 黄曾慰²曾练强²蚁细苗²李雨虹²余林^1†

1．广东工业大学轻工化工学院，广东广州 510006; 2．广州甘蔗糖业研究所广东省甘蔗改良与生物炼制重点实验室，广东广州 510316

收稿日期:2011-09-21 修回日期:2011-12-20 出版日期:2012-05-25 发布日期:2012-03-31
通信作者: 余林(1968-) ，男，教授，博士生导师，主要从事工业催化研究．E-mail: gych@gdut．edu．cn E-mail:ldfjt@126.com
作者简介:梁达奉(1964-) ，男，博士，教授级高级工程师，主要从事甘蔗生物化工研究．
基金资助:
科技部科研院所技术开发研究专项资金资助项目( NCSTE-2007-JKZX-023 ) ; 国家科技支撑计划项目( 2011BAE16B03)

Constitutive Expression of Dextranase in Pichia pastoris

Liang Da-feng^1,2Huang Zeng-wei²Zeng Lian-qiang² Yi Xi-miao²Li Yu-hong²Yu Lin¹

1. Faculty of Chemical Engineering and Light Industry,Guangdong University of Technology,Guangzhou 510006,Guangdong,China; 2. Guangdong Key Lab of Sugarcane Improvement and Biorefinery,Guangzhou Sugarcane Industry Research Institute,Guangzhou 510316,Guangdong,China

Received:2011-09-21 Revised:2011-12-20 Online:2012-05-25 Published:2012-03-31
Contact: 余林(1968-) ，男，教授，博士生导师，主要从事工业催化研究．E-mail: gych@gdut．edu．cn E-mail:ldfjt@126.com
About author:梁达奉(1964-) ，男，博士，教授级高级工程师，主要从事甘蔗生物化工研究．
Supported by:
科技部科研院所技术开发研究专项资金资助项目( NCSTE-2007-JKZX-023 ) ; 国家科技支撑计划项目( 2011BAE16B03)

摘要/Abstract

摘要： 为避免α-葡聚糖造成的制糖过程中的糖分损失、制炼难度增加以及糖产品质量下降，利用α-葡聚糖酶分解而直接去除α-葡聚糖是目前最佳的选择．文中扩增了α-葡聚糖酶基因dex，构建组成型表达载体pGAPZαA-dex; 以毕赤酵母KM71H 为受体菌，将表达载体整合进入受体菌基因组，构建了组成型表达α-葡聚糖酶的毕赤酵母工程菌．摇瓶发酵120 h，α-葡聚糖酶酶活达到60. 4U/mL，从而实现了α-葡聚糖酶在毕赤酵母中的组成型表达，使发酵过程无需使用甲醇进行诱导，提高了生产和使用安全性．

关键词: 制糖, α-葡聚糖酶, 组成型表达, 毕赤酵母, 发酵

Abstract:

Enzymolysis of using dextranase is the best way to the removal of dextrans that result in sugar loss,manufacture difficulty and quality decline during the sugar manufacture. In this paper,dextranase gene dex was cloned into a yeast constitutive expression vector pGAPZαA,and the recombinant plasmid pGAPZαA-dex was transformed into Pichia pastoris KM71H to construct an engineering strain constitutively expressing dextranase. After the
cultivation for 120 h in a shake flask,dextranase with an activity of 60.4U/mL was successfully obtained,thus implementing the constitutive expression of dextranase in Pichia pastoris. The proposed method avoids the use of methanol during the fermentation,which helps to improve the production and use safety during the sugar manufacture.

Key words: sugar manufacture, dextranase, constitutive expression, Pichia pastoris, fermentation

中图分类号:

Q786

梁达奉黄曾慰曾练强蚁细苗李雨虹余林. α-葡聚糖酶在毕赤酵母中的组成型表达[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2012, 40(5): 96-100.

Liang Da-feng Huang Zeng-wei Zeng Lian-qiang Yi Xi-miao Li Yu-hong Yu Lin. Constitutive Expression of Dextranase in Pichia pastoris[J]. Journal of South China University of Technology(Natural Science Edition), 2012, 40(5): 96-100.

[1]	李晓玺, 沈少丹, 陆萍, 等. 发酵协同多酚复合对大米淀粉消化性能的影响[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2022, 50(1): 1-8.
[2]	韩双艳李静文王媛媛. 利用SpyTag/SpyCatcher体系提高毕赤酵母重组蛋白生产能力[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2022, 50(1): 143-154.
[3]	蓝东明, 乜晓爽, 马云建, 等. 非特异性过氧合酶GmaUPO的重组表达及生化表征[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2021, 49(9): 22-28.
[4]	刘冬梅, 余佳佳, 彭鑫, 等. 德氏乳杆菌 DMLD-H1 的生物学特性研究及发酵培养基优化[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2021, 49(3): 71-79.
[5]	刘冬梅, 邝嘉华, 黄燕燕, 等. 复合乳酸菌发酵米发糕风味物质及储存特性[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2021, 49(11): 1-8.
[6]	赵强忠黄丽华陈碧芬蔡勇建邓欣伦赵谋明. 大豆分离蛋白酶解产物对自制酸奶品质的影响[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2019, 47(3): 85-92.
[7]	李良杨晓宇王雁苏悦江连洲. 植物乳杆菌发酵大豆分离蛋白凝胶的特性分析[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2019, 47(3): 93-100.
[8]	刘冬梅周全兴周劲松. 芽孢杆菌BCS 13002 的鉴定及同步糖化发酵生产高光学纯度L - 乳酸[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2017, 45(9): 81-87.
[9]	刘冬梅费永涛王盼陈谷肖性龙吴晖唐语谦. 通过L- 乳酸脱氢酶 1 的上下游 DNA 序列鉴定Lactobacillus sp．DMDL 9010[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2014, 42(3): 137-144.
[10]	马晓建张霞常春. 丙酮丁醇梭菌发酵玉米秸秆生产丁醇[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2014, 42(2): 27-32.
[11]	徐惠娟梁翠谊许敬亮郭颖张宇庄新姝袁振宏. 合成气发酵梭菌C. autoethanogenum 的生长与CO发酵研究[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2014, 42(11): 136-142.
[12]	刘冬梅陈浩胡小慧吴晖李理. 枯草芽孢杆菌BS H001发酵花生粕的性质表征[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2014, 42(11): 129-135,142.
[13]	江学斌林健聪梁世中. 毕赤酵母产木聚糖酶的动力学及流加策略[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2013, 41(12): 115-119,124.
[14]	宗敏华刘宗俊吴虹娄文勇朱定和. 油脂酵母Trichosporon fermentans HWZ004 的分批补料法高密度培养[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2013, 41(10): 47-52,65.
[15]	柯野陈丹李家洲谢明权罗晓春 . 米曲霉碱性蛋白酶基因的克隆表达及水解特性[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2012, 40(8): 88-94.