蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化

华南理工大学学报(自然科学版) ›› 2012, Vol. 40 ›› Issue (5): 107-114.

蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化

刘晓兰张雯舒郑喜群沈媛孙莹

齐齐哈尔大学农产品加工黑龙省普通高校重点实验室，黑龙江齐齐哈尔 161006

收稿日期:2011-12-05 修回日期:2012-02-27 出版日期:2012-05-25 发布日期:2012-03-31
通信作者: 刘晓兰(1962-) ，女，博士，教授，主要从事发酵工程与应用酶学研究． E-mail:liuxiaolan001@126.com
作者简介:刘晓兰(1962-) ，女，博士，教授，主要从事发酵工程与应用酶学研究．
基金资助:
国家自然科学基金资助项目( 31171744) ; 齐齐哈尔大学创新科研项目( YJSCX2010-009X)

Isolation and Purification of Novel Fibrinolytic Enzymes Obtained from Fermentation of Cordyceps militaris

Liu Xiao-lan Zhang Wen-shu Zheng Xi-qun Shen Yuan Sun Ying

The Ordinary University Key Laboratory of Agricultural Products Processing,Qiqihar University,Qiqihar 161006,Heilongjiang,China

Received:2011-12-05 Revised:2012-02-27 Online:2012-05-25 Published:2012-03-31
Contact: 刘晓兰(1962-) ，女，博士，教授，主要从事发酵工程与应用酶学研究． E-mail:liuxiaolan001@126.com
About author:刘晓兰(1962-) ，女，博士，教授，主要从事发酵工程与应用酶学研究．
Supported by:
国家自然科学基金资助项目( 31171744) ; 齐齐哈尔大学创新科研项目( YJSCX2010-009X)

摘要/Abstract

摘要： 笔者所在项目组的前期研究发现，蛹虫草深层培养可以产生至少两种纤溶酶．基于此，文中对蛹虫草深层培养产生的纤溶酶的分离纯化展开了研究．采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25 凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP 疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF 弱阳离子交换色谱和Superdex 75 凝胶色谱对纤溶酶进行分离．最终纯化后的纤溶酶Ⅰ比活力达1467．44 U/mg，纯化倍数为36．07，回收率为5．79%．纤溶酶Ⅱ比活力达1 681．58 U/mg，纯化倍数为41．33，回收率为4．00%．两种纤溶酶经电泳鉴定均达到电泳纯，相对分子质量分别约为28000 和32000．

关键词: 蛹虫草, 深层培养, 纤溶酶, 纯化, 色谱分离

Abstract:

In their earlier research,the authors have found that at least two kinds of fibrinolytic enzymes can be obtained from the submerged culture of Cordyceps militaris. As a further research,this paper deals with the isolation and purification of these fibrinolytic enzymes by means of ammonium sulfate precipitation,Sephadex G-25 gel filtration chromatography,Phenyl-Sepharose HP hydrophobic interaction chromatography,CM-Sepharose FF weak-cation exchange chromatography and Superdex 75 gel filtration chromatography. After the purification,two kinds of fibrinolytic enzymes are obtained,namely fibrinolytic enzyme I with a specific activity of 1467.44U/mg,a purification fold of 36.07 and a recovery of 5.79%,as well as fibrinolytic enzyme II with a specific activity of 1681.58U/mg,a purification fold of 41.33 and a recovery of 4.00%. SDS-PAGE results indicate that the two kinds of fibrinolytic enzymes,whose relative molecular mass are respectively about 28000 and 32000,are both electrophoretic pure.

Key words: Cordyceps militaris, submerged culture, fibrinolytic enzyme, purification, chromatographic separation

刘晓兰张雯舒郑喜群沈媛孙莹. 蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2012, 40(5): 107-114.

Liu Xiao-lan Zhang Wen-shu Zheng Xi-qun Shen Yuan Sun Ying. Isolation and Purification of Novel Fibrinolytic Enzymes Obtained from Fermentation of Cordyceps militaris[J]. Journal of South China University of Technology(Natural Science Edition), 2012, 40(5): 107-114.

[1]	郑必胜, 魏瑞敬, 郭朝万, 等. 木棉花黄酮的大孔树脂纯化及其祛痘功效分析[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2022, 50(4): 119-128.
[2]	任娇艳赖婷江燕清卢韵君刘鹏廖文镇. 乳清蛋白肽的酶法制备、分离纯化及活性评价[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2015, 43(2): 1-7.
[3]	赵强忠冯梦莹林恋竹赵谋明. 牛大力糖蛋白的分离、鉴定及抗氧化活性[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2015, 43(11): 8-15.
[4]	李立风任力刘卅王迎军. 医用细菌纤维素的制备及其细胞相容性[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2014, 42(10): 44-49,56.
[5]	傅恺付时雨张丽周攀登詹怀宇. 亚热带木腐真菌产漆酶及其酶学性质[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2011, 39(9): 152-157,164.
[6]	邓名荣朱春华郭俊朱红惠. 粤蓝链霉菌中紫罗兰蓝色素成分的分离与鉴定[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2011, 39(5): 132-137.
[7]	张少平崔堂兵陈亮郭勇. 豆豉纤溶酶的定向进化[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2010, 38(9): 138-141,146.
[8]	赖富饶温其标李琳吴磊燕吴晖余以刚. 豆皮与豆渣多糖的分级纯化、物化和功能性质研究[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2010, 38(4): 50-54,60.
[9]	林奇龄温其标欧仕益吴磊燕赖富饶 . 阿拉伯糖阿魏酸酯体外清除羟自由基[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2010, 38(12): 110-114.
[10]	张晓元郭勇吴晖赵起黄敏 . PHA-L4的纯化及结构分析[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2010, 38(12): 145-150.
[11]	张云峰魏东郭祀远梁世中. 决明子活性成分的高速逆流色谱分离[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2009, 37(10): 129-134.
[12]	王文平郭祀远李琳王明力莫莉萍 . 野木瓜水溶性多糖的提取、分离及结构分析[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2008, 36(7): 128-133.
[13]	张云峰魏东郭祀远陈峰 . 应用高速逆流色谱对穿心莲活性成分进行分离[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2008, 36(4): 127-132.
[14]	潘进权罗晓春谢明权. 雅致放射毛霉AS3.2778碱性蛋白酶的纯化及水解特性[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2008, 36(12): 106-111.
[15]	范晓丹郭勇刘柳. 产纤溶酶菌种的鉴定及纤溶酶的分离纯化[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2007, 35(4): 91-94.