枯草忏菌纤溶酶基因的克隆及表达

华南理工大学学报（自然科学版） ›› 2007, Vol. 35 ›› Issue (11): 115-119.

枯草忏菌纤溶酶基因的克隆及表达

罗文华郭勇^†韩双艳

华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510640

收稿日期:2006-07-21 出版日期:2007-11-25 发布日期:2007-11-25
通信作者: 郭勇，教授， E-mail: btyguo@ scut. edu. cn E-mail:wenhualuo@126.com
作者简介:罗文华(1975-) ，男，博士生，主要从事酶工程与生物制药研究.
基金资助:
广东省自然科学基金博士启动基金资助项目(05300230)

Cloning and Expression of Douchi Fibrinolytic Enzyme (DFE) Gene from Bacillus subtilis

Luo Wen-hua Guo Yong Han Shuang-yan

School of Biological Science and Engineering， South China Univ. of Technology , Guangzhou 510640 , Guangdong , China

Received:2006-07-21 Online:2007-11-25 Published:2007-11-25
Contact: 郭勇，教授， E-mail: btyguo@ scut. edu. cn E-mail:wenhualuo@126.com
About author:罗文华(1975-) ，男，博士生，主要从事酶工程与生物制药研究.
Supported by:
广东省自然科学基金博士启动基金资助项目(05300230)

摘要/Abstract

摘要： 为了提高豆政纤溶酶(DFE) 的表达产量，采用PCR 方法从高纤溶活性的枯草芽孢杆菌DC12 的基因组中扩增获得DFE 基因，将含有启动子至3' 非翻译区的全长1400bp基因插入大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3 ，构建了DFE 基因的表达质粒，化学转化枯草杆菌WB800 获得了DFE 的重组表达菌.试验结果表明:DFE 基因在自身启动子驱动下，在蛋白酶缺陷型的枯草杆菌中获得了高活性的分址表达;重组表达菌株培养30h 后，培养物上清液中的纤溶酶活性最高可达690U/mL.

关键词: 豆政纤溶酶, 枯草杆菌, 基因克隆, 表达

Abstract:

In order to improve the yield of Douchi fibrinolytic enzyme (DFE) , the full DFE gene encoding was amplified and cloned from the chromosome of Bacillus s叫tilis (B. subtilis) DC12 by means of PCR. The full DFE gene including the promoter, the encoding sequence and the 3'UTR was then inserted into the Escherichia coli-B. subtilis shuttle vector pBE3 and chemically transformed into B. subtilis WB800 to construct the recombinant expression strain. The results show that DFE gene is successfully expressed under the driving of its own promoter in B.subtilis WB800 and secreted into the medium , and that , after the cultivation of recombinant strain for 30 h , the activity of fibrinolytic enzyme in the supematant is as high as 690U/mL.

Key words: Douchi fibrinolytic enzyme, Bacillus subtilis, gene cloning, expression

罗文华郭勇韩双艳. 枯草忏菌纤溶酶基因的克隆及表达[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2007, 35(11): 115-119.

Luo Wen-hua Guo Yong Han Shuang-yan. Cloning and Expression of Douchi Fibrinolytic Enzyme (DFE) Gene from Bacillus subtilis[J]. Journal of South China University of Technology (Natural Science Edition), 2007, 35(11): 115-119.

[1]	谢秋玲, 谭楚敏, 王亚玉, 等. 表达外源蛋白的CHO-DG44细胞株的蛋白质组学研究[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2022, 50(11): 74-81.
[2]	蓝东明, 乜晓爽, 马云建, 等. 非特异性过氧合酶GmaUPO的重组表达及生化表征[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2021, 49(9): 22-28.
[3]	徐军, 李哲帆, 张洋, 等. 平稳随机脉动风场模拟的高维概率空间选点法[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2021, 49(10): 95-103.
[4]	谢秋玲汤杰黄嘉慧卢加刘晨雪璇. 人源化 AGR2 单抗在不同宿主细胞中表达的比较[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2019, 47(6): 142-148.
[5]	周文博刘磊张鹏吕帅. Tabular 表达式中正规函数表操作的形式语义 [J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2019, 47(2): 85-91.
[6]	蒙裕欢, 白云梦, 崔莹, 等. PPI 基因对在癌症中的共表达分析[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2019, 47(11): 78-88.
[7]	郝宁波廖海斌杨杰. 基于字典学习与稀疏表达分类的低质量字符识别[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2016, 44(5): 123-129.
[8]	韩颖赵寿经杨瑜孙尧王乐. 米陈化关键酶基因 Zmlox-2 的 RNA 干扰载体的构建[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2016, 44(3): 136-141.
[9]	柯野陈丹李家洲谢明权罗晓春 . 米曲霉碱性蛋白酶基因的克隆表达及水解特性[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2012, 40(8): 88-94.
[10]	梁达奉黄曾慰曾练强蚁细苗李雨虹余林. α-葡聚糖酶在毕赤酵母中的组成型表达[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2012, 40(5): 96-100.
[11]	潘力王云艳王斌何攀李俊星. 根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2012, 40(5): 84-89.
[12]	柯野黄伟谦李家洲谢明权罗晓春. 雅致放射毛霉蛋白酶SP1 基因的克隆及序列分析[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2012, 40(12): 128-133,144.
[13]	蒙海林汪建峰王勇张嗣良王小宁. CYP725A4分子序列分析与结构建模[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2011, 39(5): 154-159.
[14]	生书晶赵树进. 何首乌中Ⅲ型PKS基因的克隆和表达[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2010, 38(5): 144-148.
[15]	刘泽寰全艳彩唐根云龚映雪肖文娟王峻梅. 绿色木霉CBHⅡ基因的克隆及在酿酒酵母中的表达[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2009, 37(6): 91-95.