大肠杆菌MalQ基因的克隆与原核融合表达

华南理工大学学报（自然科学版） ›› 2008, Vol. 36 ›› Issue (4): 122-126.

大肠杆菌MalQ基因的克隆与原核融合表达

王水兴¹郭勇¹许杨²李燕萍²

1. 华南理工大学生物科学与工程学院, 广东广州 510006； 2. 南昌大学中德联合研究院, 江西南昌 330047

收稿日期:2007-03-07 修回日期:2007-04-19 出版日期:2008-04-25 发布日期:2008-04-25
通信作者: 郭勇，教授，博士生导师． E-mail:feyguo@scut．edu．cn
作者简介:王水兴（1965-），男，博士，南昌大学副教授，主要从事食品生物技术研究．E-mail：shuixingw@yahoo．com．cn.
基金资助:
广东省重点科技攻关项目（A301020201）

Cloning and Fusion Expression of Gene MalQ from E. coil

Wang Shui-xing¹ Guo Yong¹ Xu Yang² Li Yan-ping²

1. School of Biological Science and Engineering, South China University of Technology, Guangzhou, 510006, Guangdong, China; 2. Jiangxi-OAI Research Institute, Nanchang University, Nanchang, 330047, Jiangxi, China

Received:2007-03-07 Revised:2007-04-19 Online:2008-04-25 Published:2008-04-25
Contact: 郭勇，教授，博士生导师． E-mail:feyguo@scut．edu．cn
About author:王水兴（1965-），男，博士，南昌大学副教授，主要从事食品生物技术研究．E-mail：shuixingw@yahoo．com．cn.
Supported by:
广东省重点科技攻关项目（A301020201）

摘要/Abstract

摘要： 为了构建用于表达麦芽糖转糖基酶的基因工程菌,用PCR方法获得大肠杆菌（Escherichia coli）K12MalQ基因.将该基因插入原核表达载体pET-DsbA中,对质粒所含外源片段进行双向测序,并经局部相似性基本查询工具（BLAST）比较分析,发现其与GenBank中报道的大肠杆菌K12MalQ基因的同源性高达99%.重组质粒转化E.coliBL21（DE3）plysS,经异丙基硫代-β-D-半乳糖（IPTG）诱导后以融合蛋白形式表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示MalQ基因与DsbA表达的融合蛋白在目标位置相对分子质量约为103 000处有明显条带.经薄层层析分析粗酶液酶处理的麦芽三糖溶液,证实粗酶液具有麦芽糖转糖基活性.

关键词: 麦芽糖转糖基酶, 基因重组, 融合表达, 大环糊精, 基因克隆

Abstract:

In order to construct a gene engineering bacterium expressing amylomaltase, gene MalQ was amplified from Escherichia coli K12 by PCR, and was cloned into pET-DsbA. Then, a two-direction sequencing was performed, and the results were analyzed by means of BLAST. There displayed high similarity （99%） of the obtained gene MalQ to the gene MalQ sequence of E. coli K12 reported in the GenBank. Moreover, the recombined plasmid pET-DsbA-MalQ was transformated into E. coli BL21 （DE3） plysS and was induced by IPTG. The fusion protein of gene MalQ and DsbA with a relative molecular mass of about 103000 was detected by means of sodium dodecyl sul- phate-polyacrylamide gel electrophoresis. 4-α-glucanotransferase activity of the crude enzyme was finally demonstrated by means of thin layer chromatography.

Key words: amylomahase, gene recombination, fusion expression, cycloamylose, gene clone

王水兴郭勇许杨李燕萍 . 大肠杆菌MalQ基因的克隆与原核融合表达[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2008, 36(4): 122-126.

Wang Shui-xing Guo Yong Xu Yang Li Yan-ping. Cloning and Fusion Expression of Gene MalQ from E. coil[J]. Journal of South China University of Technology (Natural Science Edition), 2008, 36(4): 122-126.

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