hBSP与GFP非融合表达载体的构建及乳腺癌细胞转染条件优化

华南理工大学学报（自然科学版） ›› 2005, Vol. 33 ›› Issue (11): 46-50.

hBSP与GFP非融合表达载体的构建及乳腺癌细胞转染条件优化

杜红延¹ 王捷² 郭勇¹ 郑霖² 杨静² 刘大志²

1．华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510640；2．广州军区广州总医院医学实验中心，广东广州 510010

收稿日期:2005-01-17 出版日期:2005-11-25 发布日期:2005-11-25
通信作者: 杜红延(1976-)，女，博士生，主要从事生物工程研究 E-mail:gzduhongyan@126.com
作者简介:杜红延(1976-)，女，博士生，主要从事生物工程研究
基金资助:
广东省自然科学基金资助项目(04003534)；广东省医学科研基金资助项目(A2002536)

Construction of hBSP Eukaryon Expression Vector Carrying GFP and Optimization of Transfection Conditions for Breast Cancer Cells

Du Hong-yan¹ Wang Jie² Guo Yong¹ Zheng Lin² Yang Jing² Liu Da-zhi²

1.College of Biological Science and Technology,South China Univ.of Tech.,Guangzhou 510640,Guangdong,China;2.Center of Medical Research,General Hospital of Guangzhou Military Command,Guangzhou 510010,Guangdong,China

Received:2005-01-17 Online:2005-11-25 Published:2005-11-25
Contact: 杜红延(1976-)，女，博士生，主要从事生物工程研究 E-mail:gzduhongyan@126.com
About author:杜红延(1976-)，女，博士生，主要从事生物工程研究
Supported by:
广东省自然科学基金资助项目(04003534)；广东省医学科研基金资助项目(A2002536)

摘要/Abstract

摘要： 为进一步研究骨唾液蛋白(BSP)在乳腺癌细胞骨转移的整个过程中的作用，首先要建立稳定高效表达BSP的乳腺癌细胞系．文中首先从构建好的pB-hBSP载体中亚克隆hbsp基因，构建重组质粒plRES2-hBSP-EGFP，然后利用脂质体介导转染特异性骨转移的乳腺癌细胞MDA-MB-231BO，优化一系列转染条件以提高转染效率，再利用G418和流式细胞仪筛选获得稳定转染细胞．结果发现：在96孔板中，细胞融合度达到90% ；用1 μg脂质体介导280ng重组质粒转染10h，转染效率最高可达(19．70±1．10)%．

关键词: 骨唾液蛋白, 荧光蛋白, 重组表达载体, 乳腺癌细胞, 转染, 优化

Abstract:

In order to study the role of bone sialoprotein(BSP)in the metastasis of breast cancer cells to bones.a breast cancer cell line stably expressing BSP should be established.In this paper,hbsp gene was subcloned from constructed pB-hBSP vector and was then inserted into pIRES2-EGFP,thus constructing the recombinant plasmid pIRES2-hBSP-EGFP.Moreover.by the transfection of breast cancer cell MDA.MB-231 BO mediated by Lipo-fectamine 2000,the corresponding transfection conditions were optimized to improve the transfection efficiency.Stably transfected breast cancer cells were finally obtained by the selection via G41 8 and flow cytometry.It is found that,in a 96-well cell culture plate,the cell growth confluence is up to 90% ,and that when 1 μg of Lipofecta.mineTM 2000 is used to mediate 280 ng of recombinant plasmid transfecting breast cancer cells for 10 h . the trance.tion eficiency is up to(19.70±1.10)% .

Key words: bone sialoprotein, fluorescent protein, recombinant expression vector, breast cancer cell, transfec-tion, optimization

杜红延王捷郭勇郑霖杨静刘大志. hBSP与GFP非融合表达载体的构建及乳腺癌细胞转染条件优化[J]. 华南理工大学学报（自然科学版）, 2005, 33(11): 46-50.

Du Hong-yan Wang Jie Guo Yong Zheng Lin Yang Jing Liu Da-zhi. Construction of hBSP Eukaryon Expression Vector Carrying GFP and Optimization of Transfection Conditions for Breast Cancer Cells[J]. Journal of South China University of Technology (Natural Science Edition), 2005, 33(11): 46-50.

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