小麦内质网氧化还原酶在毕赤酵母中的表达

doi:10.12141/j.issn.1000-565X.180567

华南理工大学学报(自然科学版) ›› 2019, Vol. 47 ›› Issue (8): 57-63,70.doi: 10.12141/j.issn.1000-565X.180567

小麦内质网氧化还原酶在毕赤酵母中的表达

胡松青¹ 李旺¹ 陈煜² 侯轶³

1．华南理工大学食品科学与工程学院，广东广州 510640; 2．广东省食品工业研究所有限公司，广东广州 510308; 3．华南理工大学轻工科学与工程学院，广东广州 510640

收稿日期:2018-11-15 修回日期:2018-12-28 出版日期:2019-08-25 发布日期:2019-08-01
通信作者: 胡松青(1972-)，男，教授，博士生导师，主要从事食品蛋白质(酶)结构生物学、天然产物活性物质分离与功能研 E-mail:fesqhu@ scut.edu.cn
作者简介:胡松青(1972-)，男，教授，博士生导师，主要从事食品蛋白质(酶)结构生物学、天然产物活性物质分离与功能研
基金资助:
国家自然科学基金资助项目(31471691，31771906)

Expression of Wheat Endoplasmic Reticulum Oxidoreductin 1 in Pichia pastoris

HU Songqing¹ LI Wang¹ CHEN Yu² HOU Yi³

1． School of Food Science and Engineering，South China University of Technology，Guangzhou 510640，Guangdong，China; 2． Guangdong Food Industry Institute，Guangzhou 510308，Guangdong，China; 3． School of Light Industry Science and Engineering，South China University of Technology，Guangzhou 510640，Guangdong，China

Received:2018-11-15 Revised:2018-12-28 Online:2019-08-25 Published:2019-08-01
Contact: 胡松青(1972-)，男，教授，博士生导师，主要从事食品蛋白质(酶)结构生物学、天然产物活性物质分离与功能研 E-mail:fesqhu@ scut.edu.cn
About author:胡松青(1972-)，男，教授，博士生导师，主要从事食品蛋白质(酶)结构生物学、天然产物活性物质分离与功能研
Supported by:
Supported by the National Natural Science Foundation of China(31471691，31771906)

摘要/Abstract

摘要： 为开发健康天然的新型酶制剂型面粉改良剂，利用毕赤酵母重组表达了小麦内质网氧化还原酶 1(wEro1);将 wero1 基因亚克隆至毕赤酵母表达载体 pPICZα A，实现了 wEro1在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115 中的分泌表达，优化诱导表达条件后 wEro1 的产量可达(53． 24 ±2． 11) U/mL;应用硫酸铵沉淀和阴离子交换层析纯化了 wEro1，对电泳纯 wEro1进行酶学性质研究．结果表明:wEro1 具有催化二硫键异构酶(PDI)的巯基氧化活性，且最适 pH 为 7． 5，最适温度为 30℃;在低温和中性 pH 条件下，该酶具有较好的稳定性．将毕赤酵母重组 wEro1 添加到面粉中，考察其对面粉加工品质的影响，发现毕赤酵母重组 wEro1 改善面粉粉质特性的能力比大肠杆菌重组 wEro1 更强．

关键词: 小麦内质网氧化还原酶 1, 重组蛋白, 巯基氧化, 面粉粉质

Abstract: Wheat endoplasmic reticulum oxidoreductin 1 (wEro1) was expressed by Pichia pastoris recombinant to develop a healthy and natural novel biological flour improver． The wero1 gene was subcloned into the Pichia pastoris expression vector pPICZα A，and the secretory expression of wEro1 was realized in Pichia pastoris GS115． The yield of wEro1 reached (53. 24 ± 2. 11)U/mL after optimizing the induced expression conditions． The expressed products were purified by ammonium sulfate precipitation and anion exchange chromatography，and the enzymatic properties of wEro1 were investigated． The reasults show that wEro1 possesses thiol oxidizing activity catalyzing disulfide isomerase (PDI) with an optimum pH of 7. 5 and an optimum temperature of 30℃; the enzyme has good stability under low temperature and neutral pH conditions． Pichia pastoris recombinant wEro1 was added to flour to investigate its effect on flour processing quality． It was found that the ability of Pichia pastoris recombinant wEro1 to improve flour silty properties was stronger than that of E. coli recombinant wEro1．

Key words: wheat endoplasmic reticulum oxidoreductin 1, recombinant protein, sulfydryl oxidation, flour silty

中图分类号:

Q814

胡松青李旺陈煜侯轶. 小麦内质网氧化还原酶在毕赤酵母中的表达[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2019, 47(8): 57-63,70.

HU Songqing LI Wang CHEN Yu HOU Yi. Expression of Wheat Endoplasmic Reticulum Oxidoreductin 1 in Pichia pastoris[J]. Journal of South China University of Technology(Natural Science Edition), 2019, 47(8): 57-63,70.

小麦内质网氧化还原酶在毕赤酵母中的表达

Expression of Wheat Endoplasmic Reticulum Oxidoreductin 1 in Pichia pastoris

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