靶向TTF-1 的siRNA 腺相关病毒载体组装验证

华南理工大学学报(自然科学版) ›› 2012, Vol. 40 ›› Issue (1): 114-119.

靶向TTF-1 的siRNA 腺相关病毒载体组装验证

高强曹以诚^† 杨磊

华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006

收稿日期:2011-07-07 修回日期:2011-10-11 出版日期:2012-01-25 发布日期:2011-12-01
通信作者: 曹以诚(1949-) ，男，教授，博士生导师，主要从事生物医药开发和生物信息学研究．E-mail: yccao@scut.edu.cn E-mail:gaoqiang201@yahoo.com.cn
作者简介:高强(1973-) ，男，博士生，讲师，主要从事生物医药开发方面的研究．
基金资助:
国家自然科学基金重大研究项目( 90412015) ; 教育部中国网格计划生物信息网格平台子项目( B12137040130) ;广州市科技攻关计划项目( 2005Z12E4023)

Package and Verification of Adeno-Associated Virus Vector Constructed with siRNA Targeting TTF-1

Gao Qiang Cao Yi-cheng Yang Lei

School of Biological Science and Engineering,South China University of Technology,Guangzhou 510006,Guangdong,China

Received:2011-07-07 Revised:2011-10-11 Online:2012-01-25 Published:2011-12-01
Contact: 曹以诚(1949-) ，男，教授，博士生导师，主要从事生物医药开发和生物信息学研究．E-mail: yccao@scut.edu.cn E-mail:gaoqiang201@yahoo.com.cn
About author:高强(1973-) ，男，博士生，讲师，主要从事生物医药开发方面的研究．
Supported by:
国家自然科学基金重大研究项目( 90412015) ; 教育部中国网格计划生物信息网格平台子项目( B12137040130) ;广州市科技攻关计划项目( 2005Z12E4023)

摘要/Abstract

摘要： 为了解决靶向TTF-1 的siRNA 导入肺腺癌细胞的问题，设计了3 条靶向NCIH1975细胞TTF-1 基因的siRNA，并将其分别构建到腺相关病毒上．在293 细胞中装配病毒，收获病毒原初液后进行超滤浓缩、层析柱纯化，测定病毒滴度．重组病毒感染肺腺癌细胞系NCI-H1975，通过Western-Blot 实验检测siRNA 效果，利用凋亡实验验证细胞生物学效应． Western-Blot 实验测得siRNA 有较好的干扰效果，凋亡实验测得肺腺癌细胞NCIH1975产生了凋亡，从而证明具有感染性的靶向TTF-1 的siRNA 腺相关病毒载体组装成功．

Abstract:

In order to introduce siRNA targeting TTF-1 gene into lung adenocarcinoma cells,first,three TTF-1-gene-specific siRNAs for NCI-H1975 cells were respectively designed and constructed in adeno-assosiated virus( AAV) . Next,the primary culture liquid of AAV was harvested after the package of AAV in 293 cells. Then,thetiter of AAV was detected after the concentration by ultrafiltration and after the purification by column chromatography for the primary culture liquid of AAV. Finally,NCI-H1975 cells were infected by recombinant AAV,nd the interference effect of siRNA and the cell biology effect were respectively verified by Western-Blot experiments and cells apoptosis experiments,ith good interference effect of siRNA and apoptosis of NCI-H1975 being both revealed,which means that infective AAV-TTF-1-siRNA was successfully constructed.

Key words: TTF-1, deno-associated virus, mall interfering RNA, ector, nfection verification

中图分类号:

Q782

高强曹以诚杨磊. 靶向TTF-1 的siRNA 腺相关病毒载体组装验证[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2012, 40(1): 114-119.

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