根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达

华南理工大学学报(自然科学版) ›› 2012, Vol. 40 ›› Issue (5): 84-89.

根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达

潘力王云艳王斌何攀李俊星

华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006

收稿日期:2011-09-26 修回日期:2011-11-29 出版日期:2012-05-25 发布日期:2012-03-31
通信作者: 潘力(1967-) ，男，教授，博士生导师，主要从事工业微生物遗传生理及应用研究． E-mail:btlipan@scut.edu.cn
作者简介:潘力(1967-) ，男，教授，博士生导师，主要从事工业微生物遗传生理及应用研究．
基金资助:
国家自然科学基金资助项目( 30970045)

Effective Expression of Lipase in Non-Spore Aspergillus niger via Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation

Pan Li Wang Yun-yan Wang Bin He Pan Li Jun-xing

School of Biological Science and Engineering,South China University of Technology,Guangzhou 510006,Guangdong,China

Received:2011-09-26 Revised:2011-11-29 Online:2012-05-25 Published:2012-03-31
Contact: 潘力(1967-) ，男，教授，博士生导师，主要从事工业微生物遗传生理及应用研究． E-mail:btlipan@scut.edu.cn
About author:潘力(1967-) ，男，教授，博士生导师，主要从事工业微生物遗传生理及应用研究．
Supported by:
国家自然科学基金资助项目( 30970045)

摘要/Abstract

摘要： 黑曲霉( Aspergillus niger) 具有高效的蛋白表达和分泌能力．为实现异源蛋白在无孢黑曲霉中的高效重组表达，在优化遗传筛选标记的基础上，建立了根癌农杆菌介导的、以潮霉素抗性基因为筛选标记的黑曲霉转化体系．利用该体系介导米黑根毛霉脂肪酶( RML) 转化黑曲霉SH-1，通过PCR 鉴定、酶活检测、镍柱亲和层析及SDS-PAGE 电泳检测等确定成功获得了RML 的黑曲霉转化子，并通过发酵条件优化实现了RML 的高效表达，对硝基苯酚比色法测得转化子酶活最高可达15 U/mL，是其在酵母中表达水平的10 倍以上．

关键词: 无孢黑曲霉, 根癌农杆菌介导转化, 米黑根毛霉脂肪酶, 基因表达

Abstract:

Aspergillus niger ( A. niger) owns effective capabilities of protein expression and secretion. In order to implement the effective recombinant expression of heterologous protein in non-spore A. niger,several selection markers were evaluated and hygromycin B resistance gene was selected to establish an Agrobacterium tumefaciens ( A. tumefaciens) -mediated transformation system of A. niger. Then,Rhizomucor miehei lipase ( RML) was transformed into A. niger SH-1 via the A. tumefaciens-mediated transformation and was verified by means of PCR identification,enzyme activity assay,Ni affinity chromatography and SDS-PAGE. Finally,RML transformants effectively expressing RML protein were obtained after the fermentation optimization. The p-nitrophenol colorimetry results show that the transformants possesses a lipase activity of 15 U/mL,which is more than ten times that expressed in yeast.

Key words: non-spore Aspergillus niger, Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation, Rhizomucor miehei lipase, gene expression

中图分类号:

Q812

潘力王云艳王斌何攀李俊星. 根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2012, 40(5): 84-89.

Pan Li Wang Yun-yan Wang Bin He Pan Li Jun-xing. Effective Expression of Lipase in Non-Spore Aspergillus niger via Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation[J]. Journal of South China University of Technology(Natural Science Edition), 2012, 40(5): 84-89.

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